高标记率SILAC技术 — 体内氨基酸代谢标记
SILAC技术利用标记的氨基酸在细胞培养过程中对蛋白进行标记,常用于比较蛋白质组学、蛋白质与蛋白质相互作用、蛋白质与DNA相互作用、蛋白质与RNA相互作用等领域。Sigma-Aldrich公司提供99%丰度的标记氨基酸和不完全培养基,可达到最大化标记和替代,提高整体的量化精度。
SILAC技术原理十分简单:两组细胞同时培养,A组添加的是正常的“轻型”氨基酸,B组含有稳定同位素标记的“重型”氨基酸,细胞传达若干代后,稳定同位素标记的氨基酸完全掺入到蛋白质中,取代了原有的氨基酸。将两组细胞混合后提取蛋白,通过质谱鉴定可出现两段峰值,低分子量的肽段含轻型氨基酸,来源于A组,高分子量的肽段含重型氨基酸,来源于B组。如果SILAC肽段对呈现1:1的比例,则两组样品中此蛋白的丰度无异,反之则有差异。
技术特点:
- 1、体内标记,样品处理等带来的定量偏差较小,结果更精确
- 2、标记效率高,且不同蛋白的标记效率没有差异
- 3、灵敏度高,蛋白质需要量少
- 4、高通量,可同时鉴定并定量数百至数千种蛋白质
- 5、线性定量范围广
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