细胞毒性及活力检测

细胞毒性是由合成化合物、细胞自然产生毒性或免疫调节细胞(如细胞毒性T 淋巴细胞、自然杀伤细胞等)引起的细胞杀伤事件。不同于细胞凋亡及坏死,细胞毒性并非某种特定的细胞死亡机制。

细胞活力检测是检测样本中健康细胞的数目,这在优化细胞培养条件实验(如未分化细胞培养、原代细胞培养等)中是必须的。主要研究方向包括膜损伤检测、代谢活性检测、DNA合成检测等。

膜损伤检测

使用染料对细胞进行染色(台盼蓝染色法),膜受损细胞将会染上色,清点未着色的健康细胞数目,从而检测细胞膜的状态。

另一种目前更常用的方法是对细胞培养上清液中的LDH酶活性进行检测。Cytotoxicity Det.Kit PLUS(LDH) (04744934001)是使用ELISA方法在96/384孔板中高通量地定量检测细胞毒性。LDH是个稳定的细胞质蛋白,正常情况下在所有细胞中保持几乎相同的浓度,因此可通过检测受损细胞释放的LDH,对细胞毒性/细胞活性进行简单定量,从而判断细胞膜的受损情况。配合使用Cell Proliferation Reagent WST-1(11644807001)能获得更多细胞状态。

此外,还可通过检测上清液中的其他酶活方法来检测细胞毒性,如碱性磷酸酶、酸性磷酸酶等。

代谢活性检测

通过添加四咪唑盐到细胞中可进行线粒体内酶代谢活性的测定。活细胞能将四咪唑盐(如MTT)转化成蓝紫色结晶甲(Formazan),可通过分光光度计或酶标仪检测,如:通过Cell Growth Determination Kit, MTT based(CGD1)进行细胞代谢活性的检测。需要注意的是MTT法形成的Formazan 是水不溶性的,要加有机溶剂溶解,但在去上清操作时有可能会带走小部分的Formazan,故有时重复性略差。因此又开发出很多种水溶性的四咪唑盐类:如XTT、CCK-8(WST-8)等。

DNA合成检测

DNA 的新组装合成是细胞生长的必要条件,因此经常被用来检测细胞增殖、细胞活力及凋亡。可使用非放射性的核苷酸类似物5-bromo-2'-deoxy-uridine (BrdU),其能掺入增殖细胞的DNA。后续使用抗BRdU 的单克隆抗体,利用免疫化学或流式检测掺入的BRdU,从而达到检测细胞增殖的目的。Cellular DNA Fragmentation ELISA(11585045001)可使用ELISA法在细胞群落中检测细胞凋亡、坏死或细胞毒性。

细胞荧光标记检测法

PKH荧光细胞标记试剂盒,如:PKH26 Red Fluorescent Cell Linker Mini Kit for General Cell Membrane Labeling(MINI26)是采用专利的细胞膜标记技术,在细胞膜的脂质双分子层中稳定结合红色荧光染料(如:PKH26),产生稳定、清晰、精确和可重复的荧光标记细胞,可广泛用于动物、植物细胞和其它含颗粒胞膜的标记。其有效标记细胞种类广,无细胞毒副作用,标记的细胞仍保留生物学和增殖活力,是研究细胞迁移、细胞增殖和细胞-细胞间相互作用的理想工具。这些试剂盒也是细胞高通量筛选、成像、荧光分析和流式细胞术的理想选择。