DNA的合成的检测
DNA的新组装合成是细胞生长的必要条件,因此经常被用来检测细胞增殖、细胞活力及凋亡。 BrdU及EdU,都是胸腺嘧啶的非放射性类似物,其能掺入增殖细胞的DNA中,可通过对BrdU及EdU的检测,从而对DNA的合成量进行测定。
可通过Cell Proliferation ELISA, BrdU(比色法)11647229001或Cell Proliferation ELISA, BrdU(发光法)11669915001进行细胞群落中DNA合成测定(BrdU based)。优点是:实验结果与增殖细胞数目紧密相关,可一步完成细胞的温和固定和变性,操作方便稳定,不破坏细胞形态。
5-Bromo-2´-dU Labeling/Detection Kit I(荧光法)11296736001或Kit II(AP)11299964001可使用试剂盒提供的BrdU单抗,以及酶或荧光偶联二抗,检测单细胞水平的DNA合成(BrdU based)。前者通过免疫荧光检测,后者通过荧光显微镜检测。优点是:使用核酸酶变性DNA,在不伤害细胞完整性的情况下使抗体结合BrdU。体内外均可进行标记,且可同时使用其他标记进行检测,操作安全简便。适用于贴壁或悬浮细胞,冰冻或福尔马林包埋组织切片。
EdU与BrdU检测法不同:EdU-Click 检测,如EdU-Click 594(BCK-EDU594)无需进行DNA变性来检测掺入的EdU,而是通过一次快速、高度特异性的点击反应,将EdU高效地掺入到新合成的DNA之中, 通过EdU与不同荧光染料的特异性反应检测DNA复制活性,从而准确反映细胞的增殖情况。这一类细胞增殖用荧光标记采用温和的点击实验方案,准确且兼容各种抗体实验方案,整个实验可在30分钟内完成,在结果的数据丰富程度方面,堪比多重分析方法。此外,该方法适用于培养的细胞或组织切片,可用流式细胞术分析检测EdU Flow Cytometry Kit 594(BCK-FC594-100);可进行HCS分析或进行细胞裂解液微孔板检测EdU HTS Kit 594(BCK-HTS594-20);也适用于培养中的细胞,或通过注射方法进行活体实验的小动物样本,进行体内成像分析In Vivo EdU Click Kit 594(BCK594-IV-IM-M)、流式细胞检测或HCS高通量检测。(共有488、555、594、647四种荧光染料可选)