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ISHAGE 方案
定量外周血中造血干细胞数量

ISHAGE 方案介绍

随着近年来,越来越多的医疗院所将外周血干细胞移植列入常规疗法,外周血干细胞移植已经成为放疗或化疗等骨髓破坏性治疗后,造血功能及免疫系统重建的第一选择。因此,如何准确定量的测定干细胞数量,成为大家关注的问题。

目前国际公认最精确的检查方法是应用CD34抗体配合流式细胞技术进行检测。1989年,欧洲人创建了米兰方案,利用SS与CD34作双参数直方图,计算CD34阳性细胞数;同年,北欧人改进了米兰方案,加入了对照,称之米兰/北欧方案。1995年,血液病治疗及移植国际联合会(the International Society of Hematotherapy and Graft Engineering,ISHAGE)成立了干细胞绝对计数(Enumeration)小组,致力于寻求一种简单、快速、灵敏的流式细胞仪检测方法去定量外周血中的造血干细胞数量。这一方法必须是对于临床实验室中不同的流式细胞仪都有效,而且在不同的移植中心具有可比性。这一方案即在96年问世的的ISHAGE方案,至今为止,其他各种方案改进均以此方案为基础。

ISHAGE方案利用CD45可广泛表达于白细胞的特点,利用CD45/SSC散点图来圈出白细胞,再利用造血干细胞CD45表达弱的特点,圈出CD45弱表达,CD34阳性的细胞为造血干细胞。这个方法适用于各类样品,包括骨髓、外周血、脐血等。通常配合使用CD45-FITC/CD34-PE作为实验组抗体,CD45-FITC/IgG1-PE作为同型对照,以排除假阳性细胞。如下图所示。

(Michael Keeney, et al. Cytometry (Communications in Clinical Cytometry) 34:61–70 (1998))

如何建立“造血干细胞检测试剂盒”获取模板

在画图工具栏中选择散点图,鼠标拖出大小适合的方框,共建立6个散点图: 

1. 建立图1:(X轴)CD45 FITC/(Y轴)SSC散点图,设门R1;

2. 建立图2:(X轴)CD34 PE/(Y轴)SSC散点图,显示R1门内细胞,设门R2;

3. 建立图3:(X轴)CD45 FITC/(Y轴)SSC散点图,显示R1∩R2门内细胞,设门R3,圈出CD45弱表达细胞,排除CD45强阳性细胞(非特异反应细胞);

4. 建立图4:(X轴)FSC/(Y轴)SSC散点图,显示R1∩R2∩R3门内细胞,设门R4,圈出较大的干细胞,排除左下角较小的血小板和细胞碎片,命名为CD34 CELLS;

5. 建立图5:(X轴)FSC/(Y轴)SSC散点图,设门R5;

6. 建立图6:(X轴)CD45 FITC/(Y轴)CD34 PE散点图,显示R1门内细胞,设十字门;

7. 鼠标点住图4,点击“Stats”菜单下的的“Gate Stats”,显示各门内细胞信息;

8. 鼠标点住散点图6,点击“Stats”菜单下的“Quadrant Statistios”,选择需要的信息,显示散点图6中各群细胞信息;

    ISHAGE模板已完成。

货号

名称

生产厂家

6910081

造血干细胞检测试剂盒(CD34-PE/CD45-FITC)

旷博生物